冬天过得很快，春耕之后京畿北陆一带即将遍地烽火，首先是织田信长集结三万大军进驻安土城，随后松平家康带领六千三河勇士加入织田信长的联军。
浅井长政暂时不知道织田信长是否会进攻他，于是也集结本家兵马伺机而动，同时也派人去通知朝仓义景。
但是武田正信为了恶心朝仓义景，故意让田村信秀带兵在加贺越前边境进行军事演练，这让朝仓家的大军停留在一乘谷城不敢妄动。
随后足利义昭的使者就到达越中询问武田正信的意思，武田正信对足利义昭没什么感觉，而且他是最后一批得到足利义昭的书信，所以，他直接回怼就是正常演习。
使者在武田正信这里碰壁，灰头土脸般的回到了二条御所，这让足利义昭对武田正信也有一些不满意了。
看准机会的织田信长率领两万大军到达浅井家的主城小谷城，先是放火将小谷城下的城下町烧掉，逼浅井军出阵。
接着顺着姊川直上包围了左岸的横山城，然后与浅井军形成了对峙之势，其实是织田信长在等待松平家康的援军。
三月二十七日，松平家康率领六千人来援；同日，朝仓家派一门大将朝仓孙四郎景健率领1万军来援（这样重大的战役，家主朝仓义景竟然不亲自出阵，其实已经宣布了朝仓家的失败，当然，朝仓义景也害怕武田正信偷他老家）。
但是朝仓义景出兵当天，边境上一万武田军撤退，这让朝仓义景松了一口气，随后就传来武田正信出征佐渡的消息。
朝仓义景转而一想，觉得就是武田正信警告他不要在武田家背后搞小动作，朝仓义景一时间十分腻歪。
织田信长不等松平家康休息，马上开始军前评定。松平家猛将本多平八郎忠胜在会议上道：“请信长公将朝仓军交给我们三河男儿吧！”
看到松平家的三河军士气空前高涨，信长下达了第二天与朝仓，浅井军决战的命令。
三月二十八日，浅井家与朝仓家分别在野村和三家村摆开阵势迎击织田军和松平军，姊川合战终于打响。
南军阵容：
织田信长
二百四十余万石，总兵力6万，来到姊川的不到半数。
第一阵坂井政尚
第二阵池田信辉（恒兴）
第三阵木下秀吉
第四阵柴田胜家
第五阵森可成
第六阵佐久间信盛
（以上各队兵力各为3000）
本阵织田信长兵5000
包围横山城军势：
丹羽长秀兵3000
氏家直元（卜全）兵1000
安藤范俊（守就）兵1000
另有稻叶一铁通朝率兵1000前来助阵。
松平家康
六十余万石，总兵力在16000左右，来到姊川的大概有5000
第一阵酒井忠次
第二阵小笠原长忠
第三阵石川数正
（以上各队兵力各为1000）
本阵松平家康兵2000余
北军阵容：
浅井长政
三十九万石，总兵力约1万
第一阵矶野员昌兵1500
第二阵浅井政赖兵1000
第三阵阿闭贞秀兵1000
第四阵新庄直赖兵1000
本阵浅井长政兵3500
朝仓义景
八十七万石，兵数2万，来姊川大概1万
第一阵朝仓景纪兵3000
第二阵前波新八郎兵3000
本阵朝仓景健兵4000
姊川，位于琵琶湖的东北。发源于近江北境的金粪川，一直流到伊吹山以西的尚西流入琵琶湖为止，传说是阎魔大王姐姐龙王的居所。
三月二十八日午时3点左右，朝仓军在三田村摆开阵势，不断叫骂和用火枪挑拨对岸的松平军。松平军终于按捺不住，开始对朝仓军突击。
松平军以小笠原长忠为先阵，右边酒井忠次、神原康政，左边本多平八郎忠胜、内藤信重、大久保忠世，松平家康则亲自坐镇中路。
本多忠胜与神原康政此时都只有21岁，正是血气方刚的时候。开战不久，朝仓方的黑坂备中守、小林瑞周轩、鱼住左卫门尉就已被两人讨取，在两人的鼓舞下，松平军无不以必死的精神与人数占绝对优势的朝仓军死战。
战到酣时，松平军军势开始呈现不支的局面，朝仓军急忙渡到姊川的左岸试图彻底击溃松平军，松平家康亲自坐镇左路，连续击退了朝仓军十多轮的攻势。
这个时候，酒井忠次和神原康政部成功的渡到姊川的上游，趁机攻打朝仓军完全没有防守的右路，朝仓军立即陷入混乱的状态。
松平家康马上率队反击，朝仓军大乱，全军开始往姊川上游退却。
这个时候，松平军已经完全占到上风，朝仓军中只有真柄十郎左卫门直隆所率一部仍在努力奋战，就连总大将朝仓景健都被团团包围。
真柄十郎左卫门直隆，是以大力闻名北国的朝仓家猛将，出战时已是60岁的老人，仍然手持七尺八寸的大刀死战。（弟弟直澄和儿子隆基也使用六尺五寸的大刀）在不懈的突击下，终于将大将朝仓景健救出。一时间纵横战场，无人敢近，朝仓家一度呈现反败为胜的机会。
这个时候，松平军勾坂氏部等兄弟四人从中军冲出，勾坂五郎次郎与直隆单挑，只一合就被直隆斩为两半。
勾坂氏部乘机偷袭，用手链将直隆的大刀打落，真柄直隆连忙抽出随身的小太刀迎战，勾坂氏部不敌，大拇指为直隆削断，拔马便走，直隆连忙去追，谁知背后中了勾坂六郎五郎的链锤，摔倒在地。勾坂氏部回马一刀，取了首级。
直隆儿子隆基见状大怒，追上勾坂六郎五郎，将其斩于马下，单枪匹马冲入松平阵中，力尽而亡。真柄父子一死，朝仓军更加一败涂地，多位大将战死。
眼见败局已定，100多位越前武士，每人手持着四尺五寸的野太刀，组成敢死队，意图与松平家康同归于尽，德川家臣清水久三郎、加藤喜介正次、天野三郎兵卫康景等人赶紧堵在德川家康的马前，将试图袭击家康的越前敢死队和骑兵一一砍翻，家康本人也挥刀奋力拼杀，才免遭不测。
脚下人头滚滚，人踩在地上如踏入无间地狱一般恐怖。历经生死搏杀，朝仓军终于退到了姊川的上游，德川军无力继续追击，眼睁睁看着朝仓家败军撤退。
另一边浅井军的前阵大将矶野丹波守员昌，勇名无双，一开战便被兵力远不如己的浅井军占据了上风。
坂井政尚的第一阵很快就被击退，接着池田信辉的第二阵也被击败，木下秀吉的部队大多来自近江，因为矶野的关系，很快也败下阵来。
森可成与柴田胜家队更被逼到了小谷城下的十町旁，眼见信长的本阵就要与浅井军交战之时，收到松平军初显胜势消息的稻叶一铁贞通毅然率军杀到浅井家的右路，包围横山城的安藤与氏家军也杀进浅井家左路。
信长军趁势回攻，浅井军终于抵挡不住，败下阵来，这段号称织田军有十一段阵势被矶野员昌冲破的纪录首见於江户时代初期的浅井三代记，同时代的文书或纪录并未记录此事。
战后，信长向此战的功臣美浓三人众送去感状、名马、太刀等等，浅井军中，能像朝仓家真柄直隆般壮烈战死的，有远藤喜右门尉直经和安养寺三郎左卫门两人。
远藤喜右门尉直经，自从合战开始便将脸上涂满了鲜血，一副披头散发的样子冲入敌阵。眼看已经到了信长的本阵之中，为竹中半兵卫的弟弟久作发现，悄悄来到他的面前，大喝一声：“浅井家远藤喜右门尉在此！”远藤功亏一篑，身中三十多枪后壮烈战死。
安养寺三郎左卫门，是当年浅井长政与织田信长同盟的积极发起者之一，看到浅井家大败后，担任殿军一职，讨敌28人后壮烈战死，己部183人全部战死，无一人生还。